如何建立一個PCR實驗室
為了對以個特定序列進行PCR做重複檢測，需要三個不同（tóng）的區域，每一個區域的具（jù）體技術操作和試劑在下麵詳細列出。
1、樣品準備（bèi）區
這個區域專門用作樣品的準備，在製備和操作用於核酸提取的（de）試劑時應該采取預防措施（shī）：
1)PCR產物和帶有（yǒu）要（yào）擴增序列（liè）的DNA克隆不能在這個房間操作。
2)組織培養物、組織標本（běn）和血清樣品（pǐn）都帶進樣（yàng）品準備間處理，以根據應用的需要提取DNA或RNA。
3)用於樣品處（chù）理的（de）工具不能被（bèi）用作普通分（fèn）子克隆的工具（jù），也不能用作操作靶序列。
4)DNA樣品（pǐn）應該用有專門的防護或正壓活塞式移（yí）液管操作，以防（fáng）止在吸取樣品時有氣溶膠（jiāo）遺留。
5)大體積樣品應該用單獨包裝的無菌（jun1）一次性移液管（guǎn）吸取。
6)管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產生，而且管子不能（néng）用力崩開，這樣會產生氣溶膠。
7)任何時候都應該穿實驗服和帶手套（tào），手套要經常更換（huàn），尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實驗服要專門用（yòng）於樣（yàng）品準備間，經（jīng）常清洗。
2、樣品準備和（hé）RNA-PCR
RNA-PCR的額外步（bù）驟需要額外（wài）的樣品操作，這樣增加了樣品之間汙染的機會。為了避免這一問題（tí），反轉錄一步可以在樣品準備區進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止汙染的方法也有報道。
3、前PCR區
必須（xū）有專（zhuān）門（mén）用於準備各種反應的區域，這個區域必須保持幹淨，而且沒有（yǒu）來（lái）自克隆和樣品準備（bèi）的汙染。前PCR區必須要有（yǒu）試劑和準備，特別是專門（mén）用於前（qián）PCR區的正壓活塞式移液管。
4、PCR實驗室試劑的操作
1)所用的所有溶液都應（yīng）該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)汙染。
2)所有PCR試劑中使用（yòng）的水都應該是高質（zhì）量的-新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的（de），並且是（shì）高壓（yā）滅菌。
3)在20℃到25℃貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類（lèi）的抗（kàng）微生物劑，在擴增試劑或樣品製（zhì）備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑製擴增（zēng）反應。
4)所用試劑都應該（gāi）以大體積配製，實驗一下看試劑（jì）是否滿意，然後分裝成（chéng）僅夠（gòu）一次使用的量進行貯存。
5)所有試劑和樣品準備過程中都要使（shǐ）用一次性滅菌的瓶子和管子。
6)新配製的（de）試劑在用於準備新的標（biāo）本之前應該加以檢驗。
7)樣品準備和前PCR區所使用的移液（yè）管在不使用時都應該小心保存。
5、在前PCR區建立PCR混合物
1)可以把即刻可用的“主混合（hé）物”溶液配好、分（fèn）裝並保存在-20℃或4℃，在實驗室隻涉及到擴增（zēng）一種或少數幾種特異序列時這樣做很有用。
2)如果你的實驗（yàn）室使用多套引（yǐn）物，以致於配製包括所有試劑的單一反應混合物不夠經（jīng）濟，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。
3)作（zuò）為（wéi）一個規則，應該保存一套陰性、弱陽性和強陽性對照樣品來分析樣品配製和PCR前過程的（de）效率和（hé）潔淨程度。而且，你也希望通過（guò）使用一個已知的弱陽性樣品來驗證你的樣品緩衝液以證明裏麵不含擴增抑製物。
4)陰性樣（yàng）品要與每組樣品同時做，以分析是否存在樣品與樣品（pǐn）之間的汙染以及是否存（cún）在（zài）PCR產物（wù）的（de）汙（wū）染，陰性對照應該包括核酸以外的所有試劑。
5)當做陽性對照時，有兩個理由決定了應該使用最少數量的核酸。
6)由於必須（xū）有對（duì）照反應，對照模板的特點應該予以考慮。
6、控製（zhì）汙染（rǎn）的方法
已設計出（chū）很有力的酶學方法用來消除一種形式的汙染—使用UNG，這一技術能有（yǒu）效地消除由PCR產物引起的汙染。另一種控製汙染的方法是（shì）使用紫外（wài）線，這種方法不能（néng）完全消除汙染問題，但可以將汙染（rǎn）降低幾個（gè）數（shù）量級。
7、PCR儀的位置
8、後PCR區
PCR完成以後（hòu），需要分析樣品並解釋數據，應該留出一個專門用於反應後處理樣品的地方。後（hòu）PCR活動中使用的所（suǒ）用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門用於這一目的，決不能把實驗室這一區域的試劑或儀器（qì）用於任何前PCR活動。