PCR實驗室建設方案、規劃設計
PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶鏈式反應(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是一種分子生物學技術（shù），用於放大特定的DNA片段，可看（kàn）作生物體外的特殊DNA複製。通過DNA基因追蹤係（xì）統，能迅速掌握患者體（tǐ）內的病毒含量，其精確度高達（dá）納米級別（bié），精確（què）檢測乙肝病毒在患者體內存在的數量、是否複製、是否傳染、傳染性有多（duō）強、是否必（bì）要服藥、肝功能有否異常（cháng）改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病（bìng）毒（dú）藥（yào）物、判斷藥物（wù）療效如何、給臨床治療提（tí）供了可靠的（de）檢驗依據。
開展PCR實驗室應具備（bèi）的（de）條件
1、必須擁有標準的的PCR熒（yíng）光實驗室;
實時熒光定量（liàng）PCR技術於1996年由美國AppliedBiosesystems公司推出 由於該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且（qiě）與常規（guī）PCR相比，它有（yǒu）特異性更強、有效解決PCR汙染問題、自動化程度高等特點，目前（qián）已得到廣泛應用。
2、檢測設備必須符合（hé）標準PCR熒（yíng）光實驗室設置要求;
熒光定量PCR儀（yí）+實時熒光定量試劑+通用電腦（nǎo）+自動分（fèn）析軟件，構成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測係統。
3、必須通過國家臨床檢驗中心的驗收和（hé）認證;
4、檢測人員必須通過（guò）國家臨檢（jiǎn）中心業務培訓並取得合格證書（shū）;
PCR實驗室內工（gōng）作人員必須參加由（yóu）國家衛（wèi）生部或各省（shěng）臨床檢驗（yàn）中心舉辦的臨床基因擴增培訓班，並持證上崗。PCR實驗室通過驗收（shōu），實驗室至少必須應有兩個以上（shàng）持有“臨床基因檢測上崗證”。PCR實驗室必須建立嚴格的實驗室管理（lǐ）製度、建立（lì）標準化操作程序(SOP)、建立係列質量（liàng）管理（lǐ）文件等，確保實驗室日常運行符合國家衛生部的要求，確保檢測結果準確、確保實驗室（shì）衛生安全，確（què）保實驗室長期穩定運行
5、必須在無菌無塵環境下進行操作
下麵介紹如何建（jiàn）立PCR實驗室
1、建立樣品準備區
這個區域專門用作樣品的準備，在製備和操作用於核酸提取的試劑時應該采取預防措施：
⑴PCR產物和帶有要擴增序列的DNA克隆不（bú）能在這個房間操作。
⑵組織培（péi）養物、組織標本和血清樣品都帶進樣品準備間處（chù）理，以（yǐ）根據應用的需（xū）要提取（qǔ）DNA或RNA。
⑶用於樣品處理的工具不（bú）能被用作（zuò）普通分子克隆的工具，也不能用作操（cāo）作靶序列。
⑷DNA樣品應（yīng）該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作，以防（fáng）止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。
⑸大體（tǐ）積樣品應該用單獨（dú）包裝（zhuāng）的無菌一次性移液管吸取。
⑹管子（zǐ）打（dǎ）開前都要簡（jiǎn）短離心以減少氣溶膠的產生，而且管子不（bú）能用力崩開，這樣會（huì）產生氣溶膠。
⑺任何時候都應該穿實驗服和帶手套，手套要經常更（gèng）換，尤（yóu）其在抽提過（guò）程中每一步之間都要更（gèng）換。實驗服要專門用（yòng）於樣品準備間，經常清洗。
2、樣品準備和RNA-PCRRNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品（pǐn）操作，這樣增加（jiā）了樣品之間汙染的機會。為了避免這一問題，反轉錄一步可（kě）以（yǐ）在樣品準備區進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止汙染的方法也有報道。
3、建立前PCR區。
該去專（zhuān）門用於準備各種反應，這個區域必須保持幹淨，而（ér）且沒有來自克隆和樣品準備的汙染。前PCR區必須要有試劑和準備，特別（bié）是專門用於前PCR區的正壓（yā）活塞式移（yí）液管。
4、PCR實驗（yàn）室試（shì）劑的操作。
⑴所用（yòng）的所有溶液都應該沒有核酸和(或（huò）)核酸酶(DNase和RNase)汙（wū）染。
⑵所有PCR試劑中使用的水都應該是高質量的-新鮮蒸餾的去（qù）離子水，用0.22μm過濾的，並且是高壓滅菌。
⑶在20℃到25℃貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品製備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑（yì）製擴增反應。
⑷所用（yòng）試劑（jì）都應該以大體積（jī）配製，實驗一下看試劑是否滿意，然後（hòu）分裝成僅夠一次使用的量進行貯存。
⑸所（suǒ）有試劑和樣品準備過程中都（dōu）要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
⑹新（xīn）配製的試劑（jì）在用於準備新的標本之前（qián）應（yīng）該加以檢驗。
⑺樣品準備和前PCR區所使用的移液管在不使用時都應該小心保存。
5、在前PCR區（qū）建立（lì）PCR混合物。
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配（pèi）好、分裝並保存在-20℃或4℃，在實驗室隻涉及到擴增一種或少數幾（jǐ）種特異序列時這樣做（zuò）很有用。
⑵如果你的實驗室使用多（duō）套引物（wù），以致（zhì）於配製包括所有試劑的單一（yī）反應混（hún）合物不夠經濟，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。
⑶作為一個規則，應該保（bǎo）存一套陰性、弱陽性和強陽性對照樣品來分析樣品（pǐn）配製（zhì）和PCR前（qián）過程的效率和潔淨程度。而且，你也希望通過使用一個已（yǐ）知（zhī）的弱陽性樣品來驗證你的樣品緩衝液以（yǐ）證明裏麵不含擴增抑製物。
⑷陰性樣品要與每組樣品同時做，以分析是否存在樣（yàng）品與樣品之（zhī）間的汙染（rǎn）以（yǐ）及是否存在PCR產物（wù）的汙染，陰性對照應該包括核（hé）酸以外的所有試（shì）劑。
⑸當做陽性對照時，有兩個理由決定了應該（gāi）使用最少（shǎo）數量（liàng）的（de）核酸。
⑹由（yóu）於必須（xū）有對照（zhào）反應，對照模板的特點應該予以考慮（lǜ）。
6、控製汙染的方法（fǎ）。
已設計出很有力的酶學方法用來消除一種形式的汙染—使用（yòng）UNG，這一技術能有（yǒu）效地消除由PCR產物引起的汙染。另一種控製汙染的方法是使用紫外線，這種方法不能完全消除汙染問題，但可以（yǐ）將汙染（rǎn）降低幾個（gè）數量級。
7、後PCR區PCR完成以後，需要（yào）分析樣品並解釋數據（jù），應該留出一個專（zhuān）門用於反（fǎn）應後處理樣品的地（dì）方。後PCR活動中（zhōng）使用的所用試劑（jì）、一次性耗材和儀器都必須（xū）是專門用（yòng）於這一目的，決不能把實驗室這一區域的（de）試劑或儀器用於（yú）任（rèn）何前PCR活動。