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 PCR實驗(yàn)室的基礎知識

2021-02-10 11:03:38

  PCR實驗室又叫基因擴(kuò)增實驗室。PCR是聚合酶鏈式(shì)反應(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分(fèn)子(zǐ)生物學技術,用於放(fàng)大特定(dìng)的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA複製。通過DNA基因追(zhuī)蹤係統,能迅(xùn)速掌握患者體內的病毒含量,其精確度高達納米級別。PCR實驗室的建立方法如(rú)下:

  1、建(jiàn)立樣品準備區:專門用作樣品的準備,在製備和(hé)操作用(yòng)於核酸(suān)提取的試劑時應該采取預防措施:⑴PCR產物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。⑵組織培養物、組織標本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準備間處理,以根據應(yīng)用(yòng)的需要提取DNA或RNA。⑶用(yòng)於(yú)樣品處理的工具不能被用作普通分(fèn)子克隆(lóng)的工具,也(yě)不能用作操作靶序列。⑷DNA樣品應該用有專門的防護或正壓活塞式(shì)移(yí)液管操作(zuò),以防止在吸(xī)取樣品時有氣溶膠遺留(liú)。⑸大體積樣品(pǐn)應該用單獨包裝的(de)無菌一(yī)次(cì)性移(yí)液管吸取。⑹管子打(dǎ)開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產生,而且管子不能用力崩開,這(zhè)樣會產生氣溶膠。⑺任何時候都應該穿實(shí)驗服和帶手套,手套要經常更換,尤其在抽提過程中(zhōng)每一步之(zhī)間都要更換。實驗服要專門(mén)用於樣品準備間,經常清洗。

  2、樣(yàng)品(pǐn)準備和RNA-PCR RNA-PCR的額外(wài)步驟(zhòu)需要額外的樣品操(cāo)作,這樣增加了樣品之間汙染的(de)機(jī)會。為了避免這一問題(tí),反轉錄一步可以在樣品準備區進行。在RNA-PCR中應用UNG以防(fáng)止汙染的方法(fǎ)也有報道。

  3、建(jiàn)立前PCR區:專門用於準備各種反應,這個區域必須保持幹淨,而且沒有來自克隆和樣品準備的汙染。前PCR區必(bì)須要有(yǒu)試劑和準備,特別是專門用於前PCR區的(de)正壓活塞式移液管

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